Няма PCR усилване

1. Защо няма амплификация в PCR?
2. Защо моята ДНК не се усили?
3. Какво се случва, ако праймери не се добавят към PCR?
4. Как да фиксирате неспецифична амплификация в PCR?

Защо няма амплификация в PCR?

Може да се получи недостатъчно усилване, ако първоначалното количество шаблон е твърде ниско. Увеличете броя на усилвателните цикли на стъпки от 5 или, ако е възможно, увеличете количеството на шаблона. Замърсителите в сместа dNTP могат да доведат до непълна или неправилна амплификация или инхибиране на PCR. Използвайте висококачествени dNTP.

Защо моята ДНК не се усили?

1) може да имате лош дизайн на грунд или стандартизация на реакцията (Така че, оценете вашия дизайн на грунд и направете, както вече казаха други, градиентна PCR, за да оцените различни темпове на отгряване); 2) Няма ДНК (вашият протокол за извличане може да се е провалил) и така, вашите праймери могат само да се отгряват един към друг (или да ги свързват).

Какво се случва, ако праймери не се добавят към PCR?

Въпрос: Ако сте забравили да добавите праймерите към вашата PCR реакция, какво ще се случи и защо? 1. Реакцията ви ще се провали, тъй като Taq полимеразата не може да добавя основи без вече да има малко парче ДНК. ... Реакцията ви ще се провали, защото нямаше да има ензим, който да добави нови нуклеотидни бази.

Как да фиксирате неспецифична амплификация в PCR?

Използвайте по -малко цикли, когато концентрацията на шаблона е висока, и използвайте повече цикли, когато концентрацията на шаблона е ниска. 2. Времето за удължаване е твърде дълго: Прекомерното време за удължаване може да позволи неспецифично усилване. Обикновено използвайте удължено време от 1 min/kb.