Отстраняване на неизправности с Takara pcr

Вместо това условията за PCR ще трябва да бъдат оптимизирани; имайте предвид следното, когато регулирате условията за PCR:

1. Намалете количеството шаблон.
2. Увеличете температурата на отгряване.
3. Използвайте тъчдаун PCR.
4. Намалете броя на PCR циклите.
5. Препроектирайте грундовете.
6. Използвайте вложени грундове.
7. Повишете отново продукта.

1. Защо PCR не работи?
2. Как оптимизирате PCR условията?
3. Какво причинява размазване при PCR?
4. Как да разберете дали PCR е замърсен?

Защо PCR не работи?

Забравянето само на един компонент от PCR реакцията, независимо дали това е ДНК полимераза, праймери или дори матрична ДНК, ще доведе до неуспешна реакция. Най -простото решение е да повторите реакцията. ... Ако след това все още няма продукт за PCR, има вероятност нещо друго да възпрепятства реакцията ви.

Как оптимизирате PCR условията?

PCR условия

1. Използвайте по -високи температури на денатурация (напр.g., 98 ° C за разлика от 94 ° C или 95 ° C), за да се позволи пълна денатурация на шаблона.
2. Поддържайте времето за отгряване за богати на GC шаблони възможно най-кратко.
3. Използвайте грундове с по -висок T_м (>68 ° C), тъй като отгряването може да настъпи при по -висока температура.

Какво причинява размазване при PCR?

Замърсяването с ДНК, РНК в ДНК проба, високата концентрация на ДНК в PCR реакцията може да причини размазване. ... Размазването на ДНК обикновено се причинява в растенията поради високата концентрация на матрична ДНК.

Как да разберете дали PCR е замърсен?

За да проверите разтвора за замърсяване, съберете реакции на отрицателна контрола, използвайки нови реактиви, за които е известно, че не са замърсени, и добавете по едно от предполагаемите разтвори към всяка реакция. Тази реакция показва, че амплифицираните продукти, показателни за замърсяване, са доказателство, че добавеният разтвор е замърсен.