Topmusicanswers
Количеството на общата ДНК в PCR има забележим ефект върху резултата от PCR процедурата. Използването на твърде много обща ДНК води до опакована ДНК в затвореното пространство на реакционния съд и може да доведе до фалшиво зареждане и дори лош синтез на ДНК поради възпрепятстваната дифузия на големи молекули Taq полимераза.
- Колко шаблона трябва да добавя към PCR?
- Може ли твърде много праймер да инхибира PCR?
- Какво може да причини неуспех на PCR реакцията?
- Колко ДНК е достатъчно за PCR?
Колко шаблона трябва да добавя към PCR?
Въпреки че на теория една молекула от матрицата би била достатъчна, значително по -големи количества ДНК обикновено се използват за класическа PCR, например до 1 µg геномна ДНК на бозайник и само 1 pg плазмидна ДНК (1).
Може ли твърде много праймер да инхибира PCR?
Замърсителите в сместа dNTP могат да доведат до непълна или неправилна амплификация или инхибиране на PCR. Използвайте висококачествени dNTP. Използването на прекомерна концентрация на праймери може да увеличи шансовете праймерите да се свържат неспецифично с нежелани сайтове в шаблона или един с друг.
Какво може да причини неуспех на PCR реакцията?
Забравянето само на един компонент от PCR реакцията, независимо дали това е ДНК полимераза, праймери или дори матрична ДНК, ще доведе до неуспешна реакция. Най -простото решение е да повторите реакцията. ... Ако след това все още няма продукт за PCR, има вероятност нещо друго да възпрепятства реакцията ви.
Колко ДНК е достатъчно за PCR?
При типична 50 µL реакция, 1-2 единици ДНК полимераза са достатъчни за амплификация на целевата ДНК. Въпреки това може да се наложи да се коригират количествата на ензима със сложни шаблони. Например, когато в ДНК пробата присъстват инхибитори, увеличаването на количеството ДНК полимераза може да подобри добивите от PCR.
